細胞實驗教案1最終版(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 將已溶解的CaCl2溶液加入，最后加水至1000ml。5）Hanks液：Hanks原液 100ml 重蒸水 896ml %酚紅 4ml 配好的Hanks液，分裝包扎貼上標簽，經過滅菌后，4℃保存。6）詹納斯綠染液。【方法與步驟】 雞血細胞的獲得從家雞的翼根靜脈用注射器采血，注入試管后，迅速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合，制成抗凝全血。雞血細胞儲存液的制備在抗凝全血的試管中，%NaCl溶液，制成紅細胞儲備液，置于4℃冰箱內可供一周內使用。雞血細胞懸液的制備取雞血細胞儲備液200μl，加入800μl %NaCl溶液，混勻后，1200r/min離心5min，棄去上清液，再加入1000μl %NaCl溶液按上述條件離心一次。最后，棄去上清液，加入2000μl的GKN溶液制成雞血細胞懸液。計數取100μl雞血細胞懸液，加700μl的GKN溶液進行稀釋，在血細胞計數板上計數。若細胞濃度過大，用GKN溶液稀釋至177107個/ml 左右。雞血細胞的收集吸取200μl雞血細胞懸液放入離心管中，加入800μl Hanks液混勻，1000r/min離心5min。棄去上清液，用手指輕彈離心管底部，使沉淀的血細胞團塊松散。PEG誘導細胞融合 吸取100μl 37℃的50%PEG溶液，慢慢沿著離心管壁逐滴加入，邊加邊輕搖離心管，使PEG與細胞混勻，然后在37℃水浴中靜置2min。終止PEG作用緩慢加入1mlHanks液，輕輕吹打混勻，于37℃水浴中靜置5min。制備細胞懸液用吸管輕輕吹打細胞團數次使細胞團分散，1000r/min離心5min，使細胞完全沉降。棄去上清液，加Hanks液，再離心一次，棄多數上清，留少許溶液，混勻。滴片、染色和鏡鑒用鑷子取預先冰凍的干凈載玻片，迅速滴上2—3滴細胞懸浮液，用玻片從載玻片的一邊推到另一邊，使細胞分散均勻，然后置酒精燈上微微加熱干燥。將晾干的玻片放在潔凈的玻板上，用Giemsa染液[Giemsa原液用10倍體積的1/15mol/L磷酸緩沖液（）稀釋]染色30min，自來水沖洗，空氣干燥。在顯微鏡下觀察細胞融合的情況。計算細胞融合率細胞融合率是指在顯微鏡的視野內，已發生融合的細胞其細胞核總數與視野內所有細胞（包括已融合細胞）的細胞核總數之比，通常以百分比表示，而且要進行多個視野測定；進行統計分析?！咀⒁馐马棥勘緦嶒炛校?NaCl液代替了Alsver液。實驗證實，用Alsver液保存的紅細胞時間較短，而改用生理鹽水則明顯延長紅細胞的保存時間且不影響細胞融合率。高Ca2+濃度能夠提高細胞融合率。有些抗凝劑中含有和Ca2+結合的化合物，比如Alsver液中檸檬酸鈉的酸根與血液中的Ca2+形成難解離的可溶性絡合物，導致血液中的Ca2+濃度降低，故起抗凝血作用，同時會造成細胞的融合率較低。必須嚴格控制PEG的作用時間，通常處理細胞1～2min。PEG和二甲基亞砜（DMSO）并用，可以提高細胞的融合率。融合細胞繼續培養就變成了一個雜種細胞，它的染色體不是兩核的倍數，因為一些染色體會逐漸的消失。【作用】畫出觀察到的融合細胞，并計算融合率。試說明細胞融合的關鍵。第二篇：《實驗四 細胞的有絲分裂》教案《實驗四 細胞的有絲分裂》教案一、實驗目的，掌握有絲分裂各期的主要特征二、材料與用品洋蔥頭、洋蔥根尖縱切片標本、蛙胚細胞有絲分裂切片標本；普通光學顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、恒溫培養箱、小刀、小試劑瓶、培養皿、酒精燈、火柴、FAA固定液、1摩爾/升鹽酸或濃鹽酸、醋酸洋紅染液、蒸餾水三、實驗過程（1）取材將洋蔥頭置于盛水的小燒杯上，使其鱗莖浸入水中，放在25℃恒溫箱中培養。待根長到2厘米左右時，于夜晚12時至1時切取長約1厘米左右的根尖。（2）前處理將材料浸入蒸餾水內，放置冰箱（0～4℃）中24小時。（3）固定將材料從前處理的藥物中取出，用水沖洗2～3次，放入卡諾氏或FAA固定液中，固定24小時，固定液用量應為材料體積的15倍以上。如固定的材料當時不用，可以先在90%酒精中泡半小時，然后在70%酒精泡半個小時，再換入70%酒精中，置0～4℃冰箱內可保存半年。經過較長時間保存的材料，進行觀察前再用固定處理一次，效果較好。（4）解離將固定后的根尖用清水漂洗數次，用1摩爾/升鹽酸在60℃恒溫箱內處理6～20分鐘后，清水漂洗。（5）染色和壓片將解離后的根尖，切取1～2毫米長的分生組織，放在載玻片上，加1滴醋酸洋紅染液，放置約10分鐘。然后在酒精燈上緩慢往復3～4次，微微加熱（不可煮沸），隨即用解剖針將材料撥碎，蓋上蓋玻片，覆以吸水紙，對準蓋玻片下的材料，用鉛筆的橡皮頭在蓋玻片上輕輕敲擊，再用拇指適當用力下壓，但注意勿使蓋片滑動。壓好的片子中，材料鋪展成均勻的、單層細胞的薄層。 先在低倍鏡下找到根尖分生區，再轉高倍鏡，選擇較典型的有絲分裂各期圖象，仔細觀察。（1）間期細胞形態無明顯變化，體積有所增大。核仁核膜較清楚，核內染色質呈細網狀。（2）前期 細胞核脹大，核內染色質最初表現為極細盤曲的染色絲，以后染色絲逐漸縮短變粗形成染色體。染色體形態逐漸清楚，著絲點逐漸明顯。在前期結束時，核仁核膜消失。（3）中期紡錘體形成。染色體排列在細胞中央的赤道面上，從細胞極端觀察，可同時看到全部染色體；從側面觀察，則染色體排列成“一”字形。此時染色體變短變粗，其形態和數目都較清楚。（4）后期染色體著絲點分裂，每一染色體的二條單體成為二條獨立的子染色體。全部染色體分為兩組，分別向細胞的兩極移動。（5）末期兩組子染色體分別到達兩極，染色體逐漸伸長變粗，分散在核內成為染色質；紡錘體逐漸消失，核仁核膜重新出現，形成兩個新核。在兩新核之間赤道面上，出現細胞板，并逐漸形成細胞壁，最后分成兩個子細胞。在高倍鏡下觀察動物細胞有絲分裂切片標本，比較動物植物細胞有絲分裂過程中的特點。四、作業繪出你所觀察到的植物細胞有絲分裂各期的圖象。細胞有絲分裂過程中哪一時期是觀察染色體形態和進行染色體記數的最好時期？動物細胞